池塘养殖发病罗非鱼检出罗湖病毒

海南省文昌市潭牛镇一罗非鱼养殖池塘，面积15亩，平均水深2米，1台1.5kW增氧机（见图1），2016年11月一次性投放罗非鱼苗20万尾。2017年2月底过塘一部分到池塘，该池塘剩下5.5万尾罗非鱼，目前平均规格200g/尾。该池塘混养有规格750g/尾的花鲢500尾。2017年4月初开始发病，开始发病时水温27℃，刚开始时每天死鱼约20尾左右，发病20天后出现死亡高峰，高峰期每天死鱼400多尾。后来通过调水、改底，病情得到了一定的控制。5月10日，死鱼100多尾，塘主取2尾病鱼到当地利洋水产药店检查，镜检病鱼鳃丝无寄生虫，药店技术人员取2尾鱼的鳃、肝、脾、肾组织用95%固定送研究所进行病毒检测，经过实验室RT-PCR检测结果显示，2尾病鱼罗湖病毒（TilapiaLakeVirus，TiLV）呈阳性（见图2），序列测定比对结果显示其与GenBank中罗湖病毒的序列同源性为96%。送检病鱼后，该养殖户根据技术员的建议使用“碧水安”调水，内服“出败康”，但无明显效果，后来内服了一些的抗菌药物，病情得到控制，无死鱼。5月31日，该池塘又开始出现死鱼，当天死鱼10多尾。6月1日，死鱼30多尾，下午5点到该池塘，在池塘下风口漂浮着死鱼（见图3）。测定水温31.6℃，水质指标：pH值8.0、氨氮0.6mg/L、亚硝酸盐0.2mg/L、溶解氧7.37mg/L。从塘边取3尾趴边的病鱼（见图4）。6月2日，早上捞死鱼60尾。从料台附近取2尾“正常”鱼，从塘边取刚死亡的鱼1尾（见图4），外观所取病鱼体色发黑，个别病鱼眼睛凹陷。解剖见个别病鱼鳃出血，鳃盖內缘出血（见图5），肝脏肿大、出血（见图6），胆囊肿大、脾脏肿大发黑、有出血点，肠腔空，肠道充满积液（见图7），肾脏严重出血（见图8）。分别从所取6尾鱼的肝脏和肾脏中接种进行细菌分离培养，并取病鱼的鳃、肝脏、脾脏、肾脏组织用冰盒冷冻保存，带回实验室做病毒检测。结果：6尾鱼中有2尾肝脏和肾脏中分离出气单胞菌（见图9），通过实验室RT-PCR检测，所取6尾鱼有5尾罗湖病毒呈阳性（见图10）。分析：1、罗非鱼罗湖病毒（TilapiaLakeVirus，TiLV）于2009年在以色列发病的养殖罗非鱼发现并报道，该病能够导致养殖的罗非鱼大量死亡，目前该病毒已经在以色列、哥伦比亚、厄瓜多尔、埃及、泰国养殖发病的罗非鱼中得到确认。本病例通过实验室RT-PCR和序列测定确定采集的罗非鱼样品中罗湖病毒呈阳性，是我国养殖罗非鱼首次检测出。2、本病例中发病罗非鱼的主要症状是内脏组织出血，但是由于调查的病例少，难以作为罗非鱼罗湖病毒病的临床诊断依据。从细菌分离结果看，个别鱼还出现了细菌继发感染的情况，因此临床上处理该病的时应注意防细菌继发感染。第一次发病后通过处理死亡停止，第二次又开始发病死亡，原因可能是气温变化引起水温变化使病毒病反复发作和治疗细菌继发感染治愈后又复发有关。（利洋公司研究所雷燕利洋水产药店潭牛店赵振峰李海涛提供2017.06.08）